Еасс euro-asian concil for standartization, metrology and certification
|
7.2.7 Извлечение синтетических красителей из анализируемых замороженных десертов7.2.7.1 Сорбция красителей из растворов замороженных десертовИзмеряют значение рН раствора, полученного по 7.2.5. В случае отклонения измеренного значения от заданного интервала (от 2,5 до 3,5 ед. рН) значение рН доводят добавлением ледяной уксусной кислоты. Медицинским шприцем набирают от 10 до 20 см3 анализируемого раствора замороженного десерта, подготовленного по 7.2.5, и соединяют шприц с патроном. Пропускают анализируемый раствор замороженного десерта через патрон по одной капле со скоростью (15 ± 5) капель в минуту. При появлении на выходе из патрона окрашенного анализируемого раствора замороженного десерта его пропускают через второй патрон. При необходимости используют один–пять патронов, подготовленных по 7.2.6, до достижения полноты сорбции красителя. После этого каждый патрон с сорбированным красителем, заполненный оксидом алюминия, промывают 25 см3 раствора ледяной уксусной кислоты массовой концентрации 10 г/дм3 по одной капле со скоростью (15 ± 5) капель в минуту. Патроны, заполненные сорбентом Полиамид, промывают дистиллированной водой. 7.2.7.2 Десорбция красителей из патроновМедицинским шприцем набирают от 10 до 20 см3 водного аммиака и соединяют шприц с патроном по 7.2.7.1, заполненным оксидом алюминия. Пропускают водный аммиак через патрон по одной капле со скоростью (15 ± 5) капель в минуту. При необходимости промывание патрона водным аммиаком повторяют до полного обесцвечивания сорбента (оксида алюминия) в патроне. Десорбцию красителей из патронов, заполненных Полиамидом, проводят аналогично, используя элюент 5 по 7.2.1.5. Элюат (раствор водного аммиака или элюента 5 с красителем, извлеченным из патрона) собирают в выпарную чашку и выпаривают досуха на водяной бане температурой от 80 °С до 90 °С. Сразу после испарения элюата чашку с сухим остатком (красителем) охлаждают. Краситель растворяют в чашке, добавляя пипеткой от 0,3 до 0,7 см3 водно-спиртового раствора по 7.2.2. 7.2.8 Подготовка хроматографической камеры В хроматографическую камеру вносят элюент 1, приготовленный по 7.2.1.1, в количестве, необходимом для погружения хроматографической пластины на глубину не более 0,5 см от нижнего края пластины. Камеру плотно закрывают и выдерживают в течение 1 ч. 7.2.9 Подготовка пластин для ТСХ анализа На линию старта хроматографической пластины, расположенную на расстоянии 1 см от края пластины, карандашом наносят точки с интервалом не менее 1 см. | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Rf  | (3) |
где lk – расстояние до линии старта от центра пятна красителя, см;
lэ – расстояние до линии старта от линии границы элюента, см.
7.3.3 Обнаружение и идентификация красителей
На хроматографическую пластину, подготовленную по 7.2.9, микрошприцем наносят на линию старта в несколько приемов с промежуточным подсушиванием на воздухе от 0,3 до 1,0 мм3 раствора КО (или нескольких КО отдельно), приготовленных по 7.2.4.2, и от 0,5 до 3,0 мм3 анализируемого раствора по 7.2.7.2. После нанесения растворов пластину подсушивают в течение от 3 до 4 мин и затем пинцетом помещают в хроматографическую камеру, подготовленную по 7.2.8, под углом примерно 45 °. Камеру плотно закрывают. Элюирование заканчивают при достижении элюентом линии границы элюента 7,0 см от линии старта. По окончании элюирования хроматографическую пластину вынимают пинцетом и подсушивают.
При отсутствии разделения пятен красителей на хроматограмме анализ повторяют, используя элюент 2, 3 или 4.
Если на полученных хроматограммах выше стартовой линии присутствует хотя бы одно окрашенное пятно, делают заключение о наличии водорастворимого синтетического красителя в анализируемом замороженном десерте.
Линейкой измеряют расстояние от центра каждого пятна красителя и линии границы элюента до линии старта.
Значение Rf′ обнаруженного красителя вычисляют по формуле
| Rf′  | (4) |
где lk′ – расстояние до линии старта от центра пятна красителя, см;
lэ – расстояние до линии старта от линии границы элюента, см.
Визуально сравнивают цвет и положение пятен обнаруженных красителей с хроматографическими картами, полученными по 7.3.1.
При совпадении цвета и положения хотя бы одного из пятен обнаруженных красителей с одним из пятен КО идентифицируют обнаруженные красители, сравнивая значения Rf′, рассчитанные по формуле (4), со значениями Rf КО, рассчитанными по формуле 3 и приведенными в таблице 2.
Таблица 2 – Значения Rf стандартных водорастворимых синтетических красителей
| Наименование стандартного синтетического красителя | Индекс | Значения Rf | |||
| Элюент 1 | Элюент 2 | Элюент 3 | Элюент 4 | ||
| Тартразин | Е102 | 0,27 | 0,49 | 0,37 | – |
| Желтый хинолиновый | Е104 | 0,74 0,83 | 0,51 0,46 | 0,47 0,65 | – |
| Желтый «солнечный закат» FCF | Е110 | 0,58 | 0,51 | 0,64 | – |
| Азорубин | Е122 | 0,34 | 0,49 | 0,54 | – |
| Понсо 4R | Е124 | 0,43 | 0,42 | 0,27 | – |
| Красный 2G | E128 | 0.49 | 0,51 | 0,48 | – |
| Красный очаровательный AC | Е129 | 0,50 | 0,67 | 0,66 | – |
| Синий патентованный V | Е131 | 0,20 | 0,43 | 0,46 | – |
| Синий блестящий FCF | Е133 | 0,43 | 0,46 | 0,59 | – |
| Зеленый S | Е142 | – | – | – | 0,75 |
| Зеленый прочный FCF | E143 | 0,43 | 0,37 | 0,39 | – |
| Желтый 2G | Е107 | 0,52 | 0,65 | 0,31 | – |
| Амарант | Е123 | 0,29 | 0,41 | 0,43 | – |
| Эритрозин | E127 | 0,70; 0,62 | 0,63; 0,60 | 0,84; 0,34 | – |
8 Денситометрический метод определения массовой доли красителей в тонком слое сорбента
8.1 Сущность метода
Метод основан на хроматографировании красителей в тонком слое сорбента (ТСХ) с последующим определением их массовой доли методом количественной оптической денситометрии с компьютерной обработкой хроматограмм.
8.2 Подготовка к анализу
8.2.1 Приготовление растворов КО смесевых красителей
Растворы КО смесевых красителей готовят с учетом обнаруженных и идентифицированных в анализируемом образце красителей по 7.3.3.
8.2.1.1 Приготовление раствора А
В мерную колбу (с пришлифованной пробкой) вместимостью 500 см3 пипеткой вносят по 50 см3 растворов КО по 7.2.4 из числа обнаруженных и идентифицированных в анализируемом образце по 7.3.3. Затем доводят объем раствора в колбе до метки дистиллированной водой, закрывают колбу пробкой и тщательно перемешивают.
Массовую концентрацию красящего вещества каждого индивидуального красителя в полученном растворе А Сk, г/дм3, вычисляют по формуле
  | или  , (5) |
где Ск.о – массовая концентрация основного красящего вещества раствора КО,
г/дм3, приготовленного по 7.2.4;
Vк – объем раствора КО индивидуального красителя по 7.2.4, см3,
Vк = 50 см3;
V – объем раствора КО смесевых красителей, см3, V = 500 см3.
8.2.1.2 Приготовление раствора Б
Пипеткой отбирают 25 см3 раствора А, приготовленного по 8.2.1.1, и переносят в мерную колбу с пришлифованной пробкой вместимостью 50 см3. Доводят объем раствора в колбе до метки дистиллированной водой, закрывают колбу пробкой и тщательно перемешивают.
Массовую концентрацию красящего вещества каждого индивидуального красителя в полученном растворе Б
, г/дм3, вычисляют по формуле  | (6) |
где
– массовая концентрация красящего вещества каждого индивидуального красителя в полученном растворе А по 8.2.1.1,
г/дм3;
2 – коэффициент разведения.
8.2.1.3 Приготовление раствора В
Пипеткой отбирают 25 см3 раствора Б, приготовленного по 8.2.1.2, и переносят в мерную колбу с пришлифованной пробкой вместимостью 50 см3. Доводят объем раствора в колбе до метки дистиллированной водой, колбу закрывают пробкой и тщательно перемешивают.
Массовую концентрацию красящего вещества каждого индивидуального красителя в полученном растворе В
, г/дм3, вычисляют по формуле  | (7) |
где
– массовая концентрация красящего вещества каждого индивидуально-го красителя в полученном растворе В, г/дм3;
2 – коэффициент разведения.
Полученные растворы Б и В используют в качестве реперов (свидетелей).
8.2.2 Обнаружение красителей
На хроматографическую пластину, подготовленную по 7.2.9, микрошприцем наносят на линию старта в несколько приемов с промежуточным подсушиванием на воздухе от 0,3 до 1,0 мм3 растворов реперов (растворы Б и В), приготовленных по 8.2.1, и от 0,5 до 3,0 мм3 анализируемых растворов по 7.2.7.2. После нанесения растворов пластину подсушивают в течение от 3 до 4 мин и затем пинцетом помещают в хроматографическую камеру, подготовленную по 7.2.8, под углом примерно 45 °. Камеру плотно закрывают. Элюирование заканчивают при достижении элюентом линии границы элюента 7,0 см от линии старта. По окончании элюирования хроматографическую пластину вынимают пинцетом и подсушивают.
При отсутствии разделения пятен красителей на хроматограмме анализ повторяют, используя элюент 2, 3 или 4.
8.3 Проведение анализа
8.3.1 Определение массовой доли анализируемых красителей
Определение массовой доли красителя проводят на денситометре, анализируя хроматограмму, полученную по 8.2.2, с помощью детектора и компьютера.
Массу каждого красителя в пятне репера (свидетеля) КО смесевого красителя, полученного нанесением на пластину раствора Б, mБ,, мкг, вычисляют по формуле
| mБ = Сk1 VБ, | (8) |
где Сk1 – массовая концентрация красящего вещества каждого
индивидуального красителя в полученном растворе Б по 8.2.1.2,
мкг/мм3;
VБ – объем раствора Б, нанесенного на пластину ТСХ по 8.2.2, мм3.
Массу каждого синтетического красителя в пятне репера (свидетеля) КО смесевого красителя, полученного нанесением на пластину раствора В, mВ, мкг, вычисляют по формуле
| mВ = Сk2 VВ, | (9) |
где Сk2 – массовая концентрация красящего вещества каждого
индивидуального красителя в полученном растворе В по 8.2.1.3,
мкг/мм3;
VВ – объем раствора В, нанесенного на пластину ТСХ по 8.2.2, мм3.
Значения массы каждого красителя в пятне репера (свидетеля) КО смесевого красителя вводят в программу компьютерной обработки хроматограмм, а массу анализируемого красителя обозначают Мвых.
Получают результат измерения – массу анализируемого красителя, нанесенного на пластину, в микрограммах.
Если массовая доля красителя в анализируемом растворе выйдет за диапазон измерения от 0,0012 % до 0,0250 %, необходимо разбавить раствор до концентрации, соответствующей указанному диапазону, и значение массовой доли красителя, рассчитанное по формуле (11), умножить на коэффициент разбавления.
8.3.2 Обработка и оформление результатов измерений
Массовую долю красителя в анализируемых замороженных десертах Х1, %, вычисляют по формуле
 | (10) |
или
 | (11) |
где Мвых – масса анализируемого красителя в пятне на пластине ТСХ, мкг;
10–6 – коэффициент пересчета мкг в г;
V1 – объем анализируемого раствора красителя, полученного при
растворении сухого остатка красителя по 7.2.7.4, см3;
V2 – объем анализируемого раствора красителя, нанесенного на
пластину ТСХ по 8.2.2, мм3;
10–3 – коэффициент пересчета мм3 в см3;
m1 – масса пробы анализируемого замороженного десерта, взятого для
анализа, г ;
100 – коэффициент пересчета в %.
Вычисления проводят с записью результата до пятого десятичного знака.
8.3.3 Контроль точности результатов измерений
За окончательный результат измерения принимают среднеарифметическое значение Х1ср, %, двух параллельных измерений массовой доли красителя, полученных в условиях повторяемости, если выполняется условие приемлемости
(Х1макс – Х1мин) 100/Х1ср ≤ r, (12)
где Х1макс – максимальная массовая доля красителя;
Х1мин – минимальная массовая доля красителя;
Х1ср – среднее значение двух параллельных измерений массовой доли красителя;
r – значение предела повторяемости, %, приведенное в таблице 3.
Результат анализа представляют в виде
Х1ср ± 0,01 δ Х1ср, при Р = 0,95 (13)
где Х1ср – среднеарифметическое значение результатов двух измерений,
признанных приемлемыми, %;
δ – границы относительной погрешности измерений, %.
Предел повторяемости r и воспроизводимости R, а также показатель точности δ для измерений массовой доли красителя в замороженных десертах представлены в таблице 3.
Т а б л и ц а 3 – Показатели точности и прецизионности метода определения массововй доли синтетических красителей в замороженных десертах
| Диапазон измерений массовой доли красителя в замороженных десертах, % | Предел повторяемости r, % отн. при Р = 0,95, n = 2 | Предел воспроизводимости R, % отн. при Р = 0,95, m = 2 | Показатель точности (границы относительной погрешности) ± δ, %, при Р = 0.95 |
| 0,0012 – 0,025 | 10 | 15 | 10 |
Приложение А
(обязательное)
