Евразийский совет по стандартизации, метрологии и сертификации (еасс) euro-asian council for standardization, metrology and certification (easc)
|
5.6 Определение эффективности консервирования массы продукта5.6.1 ПроцедураВыполняют эксперимент отдельно для каждого штамма. 5.6.1.1 Вскрытие испытуемого продукта и отбор его отдельных порций Для каждого штамма помещают 20 г или 20 мл (см3) испытуемого продукта в стерильную посуду (5.2.1.4). 5.6.1.2 Посев тест-микроорганизмов В каждую единицу посуды добавляют 0,2 мл (см3) калиброванного инокулята (см. 5.4.2 и 5.4.3), чтобы получить конечные концентрации клеток в продукте: от 1 × 105 КОЕ/мл (КОЕ/ см3) до 1 × 106 КОЕ/мл (КОЕ/ см3) или г бактерий, и от 1 × 104 КОЕ/мл (КОЕ/ см3) до 1 × 105 КОЕ/мл (КОЕ/ см3) или г C. albicans и A. brasiliensis. Тщательно перемешивают, чтобы равномерно распределить инокулят. Начальная концентрация клеток микроорганизмов, присутствующих в инокулированном продукте, N0, определяют по результатам подсчета количества клеток микроорганизмов в калиброванном инокуляте N [см. 5.6.3.2 b)]. 5.6.1.3 Экспозиция инокулированного продукта Посуду с инокулированным продуктом хранят при температуре (22,5 ± 2,5) °C. 5.6.1.4 Отбор проб и подсчет количества микроорганизмов a) С интервалом в семь дней (T7), 14 дней (T14) или 28 дней (T28) (в зависимости от испытуемого штамма, как описано в Приложении B), отбирают 1 г или 1 мл (см3) инокулированного продукта. Взятые пробы объемом 1 г или 1 мл (см3) помещают в 9 мл (см3) нейтрализатора (см. 5.2.2.3). Смешивают до получения однородности. Если эффективность нейтрализатора установлена при разведении 1/100 [см. 5.5.2 b)], выполняют еще одно десятикратное разведение в нейтрализаторе. П р и м е ч а н и е – При выполнении второго разведения допускается использование разведения другой кратности, если при такой кратности установлена эффективность нейтрализатора (см. 5.5.4), и она учтена при расчете Nx (см.5.6.3.3). Выдерживают пробу в течение (30 ± 15) мин при комнатной температуре. b) Начиная от разведения в нейтрализаторе 1/10 (или от 1/100, или другой кратности, если эффективность нейтрализатора установлена для разведения 1/100 или для другой кратности), выполняют серию последовательных десятикратных разведений в нейтрализаторе (см. 5.2.2.2), чтобы выполнить подсчет количества клеток выживших микроорганизмов. c) Через семь дней следует выполнить подсчет клеток микроорганизмов во всех полученных разведениях в нейтрализаторе (1/10, а затем 1/100, или другом). Через 14 и 28 дней допускается уменьшить количество разведений, в которых выполняется подсчет клеток микроорганизмов, исходя из результатов измерения через семь дней. d) Выполняют подсчет количества клеток микроорганизмов с помощью подходящей питательной среды (TSA для бактерий, SDA для C.albicans и PDA для A.brasiliensis). Подсчет количества клеток проводят из двух параллельных высевов. В чашки Петри диаметром от 85 до 100 мм вносят 1 мл (см3) из каждого разведения, и заливают 15 – 20 мл (см3) расплавленной питательной среды, выдерживаемой на водяной бане при температуре не более 48 °C. Осторожно перемешивают содержимое, поворачивая и наклоняя чашки Петри для равномерного распределения микроорганизмов. Дают застыть на горизонтальной поверхности при комнатной температуре. Допускается применение иных методов подсчета количества микроорганизмов (поверхностный посев и фильтрация мембраной). Их применение требует адаптации метода с учетом параметров, указанных выше. Для подсчета рекомендуется использовать 1 мл (см3) смеси, так как это повышает точность. e) Бактерии и C. albicans выращивают при температуре (32,5 ± 2,5) °C от 48 до 72 ч, A. brasiliensis выращивают при температуре (22,5 ± 2,5) °C от трех до пяти дней. 5.6.2 Подсчет колонийПосле выращивания оценивают количество колоний в чашках. Для всех подсчетов [см. 5.4.2.5, 5.4.3.5 и 5.6.1.4 c)] учитывают чашки, в которых обнаружено от 30 до 300 колоний бактерий и C. albicans и от 15 до 150 колоний A. brasiliensis. Когда количества колоний выживших клеток микроорганизмов, полученных, как описано в 5.6.1.4 c) перестанут входить в эти пределы [количество более 300 (150 для A. brasiliensis) или менее 30 (15 для A. brasiliensis)], фиксируют результат как > 300 (>150 для A. brasiliensis) или < 30 (< 15 для A. brasiliensis). Определяют количество жизнеспособных клеток микроорганизмов, присутствующих в пробе на момент времени t0 (N0 = N/100) в соответствии с 5.6.3.2, и количество выживших клеток микроорганизмов при взятии каждой пробы, Nx, в соответствии с 5.6.3.3. 5.6.3 Расчеты5.6.3.1 Общие положения Эффективность нейтрализатора должна быть проверена согласно 5.5.4, а экспериментальные данные должны соответствовать правилам, приведенным в 5.6.2. 5.6.3.2 Определение начального количества микроорганизмов N и N0 a) Получают N количество клеток микроорганизмов в калиброванных суспензиях (см. 5.4.2 и 5.4.3) в КОЕ/мл (КОЕ/ см3) по формуле (1)  , (1)где  – среднее количество колоний (см. 5.6.2), подсчитанных на двух параллельных чашках Петри;V – объем инокулята, помещенного в каждую чашку [1 мл (см3), в соответствии с 5.4.2 и 5.4.3], мл (см3); d – кратность разведения испытуемого раствора. Для бактерий N должно быть в пределах от 1 × 107 КОЕ/мл (КОЕ/ см3) до 1 × 108 КОЕ/мл (КОЕ/ см3), а для C. albicans и A. brasiliensis – от 1 × 106 КОЕ/мл (КОЕ/ см3) до 1 × 107 КОЕ/мл (КОЕ/ см3). b) Определяют N0 количество клеток микроорганизмов, внесенных в продукт в момент времени t0 по формуле (2)  , (2)Для бактерий N0 должно быть в пределах от 1 × 105 КОЕ/мл (КОЕ/ см3) и 1 × 106 КОЕ/мл (КОЕ/ см3) или г, а для C. albicans и A. brasiliensis от 1 × 104 КОЕ/мл (КОЕ/ см3) до 1 × 105 КОЕ/мл (КОЕ/ см3) или г. 5.6.3.3 Подсчет количества клеток микроорганизмов в каждый момент взятия порций (аликвот) образца, Nx Определяют  количество микроорганизмов, в КОЕ /мл (КОЕ/ см3) или г, в продукте в каждый момент взятия образца tx (T7, T14 or T28), по формуле (3) , (3)где C – среднее количество колоний (см. 5.6.2), подсчитанных на двух параллельных чашках Петри; V – объем инокулята, помещенного в каждую чашку [1 мл (см3), в соответствии с 5.6.1.4 a)], мл (см3); d – кратность разведения, соответствующая сохраненному и подсчитанному разведению [см. 5.6.1.4 c) с учетом второго десятикратного разведения в нейтрализаторе согласно 5.6.1.4 a)]. 5.6.3.4 Снижение количества клеток микроорганизмов Считают показатели снижения, Rx, выраженные в логарифмических единицах, в каждый момент взятия образца по формуле (4):  , (4)где N0 – количество клеток микроорганизмов, внесенных в момент времени t0 [см. 5.6.3.2 b)]; Nx – количество жизнеспособных микроорганизмов через определенные промежутки времени, tx (см. 5.6.3.3). Снижение может отсутствовать. Также может наблюдаться увеличение количества микроорганизмов. |
