Евразийский совет по стандартизации, метрологии и сертификации (еасс)
|
ПРИЛОЖЕНИЕ Б(справочное) Структурные формулы (в форме оснований) и некоторые характеристики водорастворимых витаминов Таблица Б.1
ПРИЛОЖЕНИЕ В(справочное) Примеры типовых хроматограмм и УФ-спектры поглощения витаминов в обогащенной соковой продукции  Рисунок В.1 УФ-спектр витамина B1, сдвиг максимума абсорбции за счет матричного влияния  Рисунок В.2 УФ-спектр витамина B6  Рисунок В.3 УФ-спектр витамина PP  Рисунок В.4 Хроматограмма нектара из яблок, черноплодной рябины и черной смородины, обогащенного витаминами и минеральными веществами с выделенным хроматографическим пиком витамина B1  Рисунок В.5 Фрагмент хроматограммы витаминного премикса с хроматографическими пиками витамина B1 и витамина С, оказывающего мешающее влияние на определение витамина В1 в случае спектрофотометрического детектирования  Рисунок В.6 Хроматограмма нектара из яблок, черноплодной рябины и малины, обогащенного витаминами и минеральными веществами с хроматографическим пиком витамина B6  Рисунок В.7 Хроматограмма нектара из яблок, черноплодной рябины и черной смородины, обогащенного витаминами и минеральными веществами с хроматографическим пиком витамина РР ПРИЛОЖЕНИЕ Г(обязательное) Определение эффективности хроматографической колонки Проверку оптимальности выбранных хроматографических условий (характеристик колонки) проводят по основным характеристикам, приведенным в таблицах Г.1 - Г.3. Таблица Г.1 - Основные характеристики разделения витаминов B1, B6, PP
Таблица Г.2 - Основные характеристики разделения витамина В1
Таблица Г.3 - Основные характеристики разделения витаминов В2 и В6
Время удерживания соответствующего компонента определяют непосредственно из хроматограмм двух параллельных измерений. В случае обнаружения отклонения времени удерживания более чем на 5 % для любого из анализируемых витаминов, строят новую градуировочную зависимость во всем диапазоне измерений. Число теоретических тарелок рассчитывают по формуле  , (Г.1)где tR – время удерживания пика витамина B1, мин; Wb – ширина пика витамина B1 у основания, мин. Колонка считается удовлетворительной при значении числа теоретических тарелок не ниже 10 % от указанного в таблице. Разрешение между двумя хроматографическими пиками Rs рассчитывают по формуле  , (Г.2)где tR2 – время удерживания витамина С, мин; tR1 - время удерживания витамина B1, мин; Wb1, Wb2 - ширина пика витамина С и витамина B1 у основания, мм. Колонка считается удовлетворительной при значениях Rs 0,34. Коэффициент емкости рассчитывают по формуле  , (Г.3)где tR – приведенное время удерживания витамина B1, мин; tM – мертвое время удерживания витамина B1, мин. Колонка считается удовлетворительной при значении коэффициента емкости не превышающем 10 %, от указанного в таблице. При невозможности достижения требуемых условий эффективности хроматографического разделения проводят испытания других хроматографических колонок аналогичным образом. Контроль эффективности хроматографического разделения проводят не реже одного раза в месяц. ПРИЛОЖЕНИЕ Д(рекомендуемое) Порядок кондиционирования хроматографической колонки Д.1. Включение и вывод хроматографической системы на рабочий режим, включая кондиционирование колонки, проводят в соответствии с руководствами по эксплуатации и рекомендациями производителя оборудования. Д.2. Общая схема вывода системы на рабочий режим сводится к следующему: - насос системы промывают рабочим элюентом (если система была под другим элюентом, ее перемывают в соответствии с совместимостью растворителей); - на колонку подают подвижную фазу, приготовленную по 5.3.4 со скоростью 0,10 см3/мин до установления постоянного давления; - скорость потока постепенно увеличивается с шагом 0,1 см3/мин, с установлением постоянного давления после каждого прибавления, до 1,0 см3/мин; - перед первым анализом, с помощью программного обеспечения, в соответствии с руководством пользователя выполняют операции в соответствии с таблицей Д.1 Таблица Д.1 - Порядок вывода хроматографа на рабочий режим
Выполнение данной операции осуществляют с использованием условий, указанных в таблице Д.2 Таблица Д.2 - Профиль градиента при холостом определении
Д.3 Выключение хроматографической системы после выполнения анализа проводят в соответствии с руководством по эксплуатации при этом: - скорость потока снижают до 0,1 см3/мин и останавливаются; - насос промывают водой; - колонку отмывают водой при скорости (0,5-1,0) см3/мин в течение 30 мин. и выключают.
1) Дату введения стандарта в действие на территории государств устанавливают их национальные органы по стандартизации 1 Колонки Thermo Scientific AQUASIL C18 HPLC, RESTEK Pinnacle DB Aqueous C18 и Agilent Zorbax AAA опробованы и обеспечивают необходимое разделение. Данная информация не является рекламой указанных колонок и приведена для удобства пользователей настоящего стандарта 1 Время подачи дериватизирующего реагента от момента ввода пробы (без учета времени заполнения реагентом реакционного модуля) до максимальной точки выхода хроматографического пика. Данная величина используется для отключения подачи дериватизирующего реагента. | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
