Евразийский совет по стандартизации, метрологии и сертификации (еасс)
|
5.4 Проведение измерений5.4.1 Условия хроматографического анализаИзмерения проводят при следующих параметрах: - температура термостата колонки: (25±5) С - объем вводимой пробы: 20 мм3; - элюент: раствор дигидрофосфата калия по 5.3.4 - режим элюирования: в соответствии с таблицей 5. Таблица 5 – Профиль градиента при определении витаминов B1, B2 и РР
В зависимости от типа применяемого хроматографа и хроматографической колонки допускается изменение условий анализа, обеспечивающих разделение компонентов пробы указанное в приложении Г, таблица Г.1. 5.4.2 Условия проведения измеренийПри проведении измерений соблюдают следующие условия: Температура окружающего воздуха ................................................. (20 ± 5) °С; Атмосферное давление................................................................... (97 ± 10) кПа; Относительная влажность.......................................................... от 40 % до 90 %; Напряжение в электросети ................................................................(220 ± 20) В; Частота тока в электросети ................................................................ (50 ± 1) Гц. Помещение, в котором проводят работы с реактивами должно быть обеспечено приточно-вытяжной вентиляцией. Все операции с реактивами следует проводить в вытяжном шкафу. 5.4.3 Построение градуировочной характеристики Для установления градуировочной характеристики в инжектор хроматографа вводят с помощью микрошприца 20 мм3 каждого градуировочного раствора в соответствии с таблицей 4. Для каждого градуировочного раствора выполняют два параллельных измерения в условиях повторяемости по п. 5.4.5. Компоненты идентифицируют по абсолютным значениям времени удерживания. Рассчитывают с помощью компьютерной программы обработки данных или вручную методом наименьших квадратов градуировочные коэффициенты и устанавливают градуировочную характеристику для площади пика каждого витамина в градуировочном растворе:  ; (2)где  – площадь пика витамина (среднее из трех измерений) при анализе i-го градуировочного раствора, AUc; – массовая концентрация витамина в i-ом градуировочном растворе, мг/дм3;b,k – градуировочные коэффициенты в уравнении прямой, рассчитанные методом наименьших квадратов по формулам:  ;  (3)Градуировочную характеристику, рассчитанную методом наименьших квадратов, считают приемлемой, если значение квадрата коэффициента корреляции R2 для каждого витамина составляет не менее 0,990. Градуировочную характеристику строят заново в случае замены оборудования, колонок, партий реактивов или при выявлении несоответствия метрологическим требованиям результатов контроля стабильности по 5.4.4, но не реже одного раза в месяц. 5.4.4 Контроль стабильности градуировочной характеристики Контроль стабильности градуировочной зависимости проводят ежедневно перед началом измерений. Анализируют два градуировочных раствора приготовленных по 5.3.5.2 с массовой концентрацией витаминов близкой к началу и к концу диапазона измерений в тех же условиях, в которых была установлена градуировочная характеристика. Градуировочную характеристику считают стабильной в случае, если для обоих растворов выполняется условие:  ; (4)где Сiизм, Сiгр – значение массовой концентрации i-го витамина в градуировочном растворе, измеренное и найденное по градуировочной характеристике соответственно, мг/дм3, Кi гр – норматив контроля i-го витамина,  ,где ± di – границы относительной погрешности i-го витамина, % (таблица 6, 11, 14). Если условие стабильности (4) не выполняется только для одного градуировочного раствора, то выполняют повторное измерение этого раствора с целью исключения результата, содержащего грубую ошибку. Если градуировочная характеристика нестабильна, выясняют причины нестабильности и повторяют контроль стабильности с использованием других растворов для градуировки, предусмотренной методикой. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики прибор градуируют заново. Примечание – Рекомендуется нахождение параметров уравнения градуировочной зависимости и контроль стабильности градуировочной зависимости проводить по алгоритмам ГОСТ Р ИСО 11095-2007 «Линейная калибровка с использованием образцов сравнения» (ISO 11095:1996) 5.4.5 Анализ проб В инжектор хроматографа микрошприцем вводят по 20 мм3 анализируемой пробы и проводят анализ в условиях, указанных в п. 5.4.1. Регистрируют на хроматограммах пики соответствующие временам удерживания витаминов, найденных при анализе градуировочных растворов. Относительное расхождение времени удерживания идентифицированных витаминов в анализируемой пробе не должно отличаться от времени удерживания витаминов в градуировочном растворе более чем на 5 %. В противном случае измерения повторяют. Примеры хроматограмм и условия определения конкретных витаминов приведены в приложении В. Значения площади пика витаминов на хроматограммах используют для расчета массовой концентрации по разделу 5.4.6 при условии, что они не выходят за верхнюю границу диапазона градуировки хроматографа. В противном случае уменьшают вводимый объем пробы в два раза и проводят ее повторный анализ. При расчете по п. 5.4.6 площадь пика умножают в два раза. | ||||||||||||||||||||||||||||
